Technique de biologie moléculaire


Technique de biologie moléculaire

Techniques de biologie moléculaire

Principales techniques utilisées couramment en biologie moléculaire :

Sommaire

Électrophorèse

  • Électrophorèse sur gel : cette technique permet de séparer des molécules en fonction de leur taille (appelée poids moléculaire) en les faisant migrer à travers un gel par application d'un champ électrique. Le courant entraîne les molécules et les mailles du gel les freinent. Leur migration dépend donc à la fois de leur taille mais aussi de la concentration du gel; elles iront d'autant plus loin qu'elles sont de petite taille et le gel moins concentré. Cette technique peut être utilisée pour séparer de l'ADN, de l'ARN (gels d'agarose ou d'acrylamide) ou des protéines (gel d'acrylamide).
  • Électrophorèse sur gel en gradient dénaturant  : Denaturing Gradient Gel Electrophoresis(DGGE).
  • Électrophorèse capillaire : Variante d'électrophorèse utilisée pour le séquençage de l'ADN.

Manipulation d'ADN et d'ARN

  • Digestion enzymatique (restriction digest) : technique utilisant des enzymes de restriction pour couper spécifiquement une molécule d'ADN afin de la manipuler ou de la cloner.

En fonction de la quantité d'ADN souhaitée des midi-préparations ou des maxi-préparations sont également utilisées.

  • Clonage : technique qui consiste à isoler un fragment d'ADN et à le multiplier à l'identique en l'« insérant » dans une molécule d'ADN « porteuse » appelée vecteur permettant son amplification.
  • Mutagenèse dirigée : techniques qui permettent de modifier de façon précise et ponctuelle des bases d'un génome.

Amplification

  • Réaction de polymérisation en chaine : Polymerase chain Reaction (PCR). Cette technique est utilisée pour amplifier de l'ADN, c’est-à-dire obtenir une grande quantité de copies d'une séquence nucléotidique donnée.

Séquençage

Les différentes méthodes de séquençage :

  • Méthode chimique ou méthode de Maxam et Gilbert;
  • Méthode enzymatique ou méthode de Sanger.

Quantification

Autres

Manipulation de protéines

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